Internalizálódott hatóanyagok mennyiségi meghatározása és sejten belüli megoszlásának, lokalizációjának vizsgálata
Célunk, olyan hatóanyag jelöltek előállítása, amelyek a célsejtekbe – tumorsejt vagy intracelluláris kórokozóval fertőzött gazdasejt – szelektíven bejutnak, és ott fejtik ki hatásukat. A munka során az egyes hatóanyag jelölt vegyületeket, konstrukciókat előállítjuk, és kémiailag jellemezzük.
A hatóanyagok szerkezet-hatás összefüggéseinek feltárása során fontos a vegyületek sejtbejutásának és a sejten belüli sorsának, disztribúciójának jellemzése. A munka keretében célunk, hogy RP-HPLC-MS módszer alkalmazásával meghatározzuk az egyes hatóanyag jelöltek (kis molekulatömegű aktív vegyületek, peptid típusú vegyületek, peptidkonjugátumok, nanokonstrukciók stb.) esetében a sejtekbe jutott anyagmennyiséget kvantitatív, vagy szemikvantitatív módon, sejt extraktumokból. Az egyes sejttípusokat (tumorsejtek, intracelluláris patogének gazdasejt modelljei stb.) kezeljük a hatóanyag jelöltekkel és a kezelést követően a sejtekből a hatóanyagot, illetve annak metabolitjait extraháljuk. Az extraktumok RP-HPLC-MS elemzésre történő előkészítése az extrahálási folyamat során több centrifugálási- és tisztítási lépéssel történik. A munkához nagyszámú minta feldolgozása egyidőben szükséges, ez a különböző hatóanyag típusok esetében módszer optimálására is lehetőséget ad (kalibrációs görbék, kísérleti körülmények szisztematikus változtatása stb.).
Az RP-HPLC-MS meghatározásokat megelőzően, az extrakció előtt, fluoreszcens mikroszkóppal vizsgáljuk a hatóanyagok sejtbejutását és a bejutott vegyületek, valamint a felszabaduló származékok intracelluláris lokalizációját.
Az RP-HPLC-MS és a fluoreszcens mikroszkópia egyidejű alkalmazása lehetővé teszi, hogy fluoreszcens sajátságú hatóanyagjelöltek, hordozó konstrukciók esetében jellemezhessük a hatóanyag sejtbejutási sajátságait az extraktumokból nyert kvantitatív mérési adatokkal, valamint a sejten belüli disztribúciót képalkotással és mennyiségi elemzéssel is követhessük, fontos szerkezet – hatás összefüggések definiálása érdekében.
Schlosser Gitta, Oláhné Szabó Rita, Bősze Szilvia, Horváth Lilla